Différenciation iPSc - Organoïdes

Différenciation iPSC – Organoïdes

La combinaison des avancées technologiques telles que la culture des cellules souches pluripotentes induites (iPSC) et la différenciation cellulaire offre un accès à des structures biologiques nommées les Organoïdes.

L’utilisation de ces modèles cellulaires multidimensionnels est un appui majeur pour la recherche médicale actuelle.  Ils sont d’excellents modèles d'organes miniaturisés et simplifiés permettant de mieux comprendre les processus du développement, de la physiologie ou des pathologies humaines. Ils sont devenus un outil indispensable dans le développement de la médecine personnalisée, le screening des médicaments et la thérapie cellulaire.

La plateforme « Différentiation iPSC – Organoïdes » permet d’accueillir toute personne de l’INM et de l’extérieur qui désire réaliser des projets scientifiques dans le domaine des cellules souches pluripotentes induites (iPSC) et leur différentiation en organoïdes.

Nous possédons en particulier une expertise en différentiation des iPSC humaines en Épithélium Pigmentaire Rétinien (EPR) et en organoïdes rétiniens qui contiennent des photorécepteurs ainsi que d’autres types de cellules de la rétine.

Depuis 2020, la plateforme fait partie du Réseau des Plateformes Organoïdes de Montpellier (POM) qui a pour but de réunir tous les experts dans ce domaine à Montpellier et sa région.

 

La responsable de la plateforme « Différentiation iPSC – Organoïdes » assure :

- l’organisation et la gestion de la plateforme ;

- l’adaptation et les mises au point des méthodologies ;

- le conseil, l’orientation et la formation des futurs utilisateurs ;

- la coordination et l’accompagnement des utilisateurs ;

- la mise à disposition, maintenance et réparation d'équipement ;

 

Equipement et ressources :

- Postes Sécurité Microbiologiques (HERASafe, FASTER)

Fig 1 petit

- Incubateurs à CO2 (Panasonic, Thermo Fischer Scientific)

- IncuCyte (Sartorius)

- NucleoFector 4D (Lonza)

- Systèmes d’imagerie (Olympus, Lynx EVO)

Fig 2 IncuCyte petit

Fig 3 Nucleofecteur petit

Fig 4 Olympus petit

               Nucleofector                                               Olympus

 

 

IncuCyte

 

 

 

 

Protocoles disponibles :

Fig 5 petit

- Reprogrammation des cellules somatiques en iPSC ;

- Amplification, congélation et décongélation des iPSC ;

- Edition génomique par CRISPR/Cas des iPSC ;

- Séparation clonale des iPSC par la cytométrie de flux;

- Différentiation des iPSC en corps embryoïde ;

- Analyse de pluripotence (RT-PCR, qPCR, IF).

 

 

Publications principales :

  1. Sanjurjo-Soriano, C., Erkilic, N., Mamaeva, D and Kalatzis, V. CRISPR/Cas9-mediated genome editing to generate clonal iPSC lines. (2021) iPS Cells: Methods and Protocols 2nd edition (Ed. K. Turksten). Springer protocols, NY, USA.
  1. Erkilic N, Gatinois V, Torriano S, Bouret P, Sanjurjo-Soriano C, De Luca V, Damodar K, Cereso N, Puechberty J, Sanchez-Alcudia R, Hamel CP, Ayuso C, Meunier I, Pellestor F & Kalatzis V. (2019) A novel chromosomal translocation identified due to complex genetic instability in iPSC generated for choroideremia. Cells 8:1068.
  2. Sanjurjo-Soriano C, Erkilic N, Baux D, Mamaeva D, Hamel CP, Meunier I, Roux AF & Kalatzis V. (2019) Genome Editing in Patient iPSCs Corrects the Most Prevalent USH2A Mutations and Reveals Intriguing Mutant mRNA Expression Profiles. Mol Ther Methods Clin Dev. 17:156-173.
  3. Erkilic N, Sanjurjo-Soriano C, Manes G, Dubois G, Hamel CP, Meunier I & Kalatzis V. (2019) Generation of a human iPSC line, INMi004-A, with a point mutation in CRX associated with autosomal dominant Leber congenital amaurosis. Stem Cell Res. 38:101476.
  1. Erkilic N, Sanjurjo-Soriano C, Diakatou M, Manes G, Dubois G, Hamel CP, Meunier I & Kalatzis V. (2019) Generation of a human iPSC line, INMi003-A, with a missense mutation in CRX associated with autosomal dominant cone-rod dystrophy. Stem Cell Res. 38:101478.
  1. Sanjurjo-Soriano C, Erkilic N, Manes G, Dubois G, Hamel CP, Meunier I & Kalatzis V. (2018) Generation of an iPSC line, INMi002-A, carrying the most prevalent USH2A variant associated with Usher syndrome type 2. Stem Cell Res. 33:247-250.
  1. Sanjurjo-Soriano C, Erkilic N, Manes G, Dubois G, Hamel CP, Meunier I & Kalatzis V.(2018) Generation of an iPSC line, INMi001-A, carrying the two most common USH2A mutations from a compound heterozygote with non-syndromic retinitis pigmentosa. Stem Cell Res. 33:228-232.

 


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