La plateforme d’imagerie de l’Institut des Neurosciences de Montpellier fait partie depuis sa création en 2004 de la plateforme régionale d’imagerie Montpellier Ressources Imagerie (MRI : www.mri.cnrs.fr). Elle réunit des compétences scientifiques et techniques dédiées à l’imagerie en neurosciences. En outre, la plateforme abrite différents appareils de pointe en microscopie d'échantillons fixés ou vivants, ainsi que des solutions d'analyse d'images. Elle est certifiée ISO 9001 : 2015 (LRQA) et labellisée IBISA (Infrastructures Biologie Santé et Agronomie : www.ibisa.net). La plateforme est ouverte aux laboratoires extérieurs publics et privés.

Nos missions sont multiples :

• Mise à disposition de postes de microscopie et d'analyse d'images
• Aide à la préparation et à l'observation des échantillons
• Adaptation et mise au point de nouvelles applications in vitro et in vivo
• Automatisation du traitement d'images
• Formation et enseignement
• Expertise

 

1. MICROSCOPIE MULTI-PHOTONIQUE

ZEISS LSM 7MP / OPO

Microscope multi-photon sur statif droit ZEISS Axio Examiner. Système équipé d’un laser pulsé Coherent Chameleon Ultra II (longueurs d'onde entre 690 et 1010nm) couplé à un Chameleon Compact OPO (Optical Parametric Oscillator) de Coherent (longueurs d'onde entre 1050 et 1300nm). 4 détecteurs : 2 PMT NDD classiques et 2 PMT BiG avec comptage de photons possible. Contrôle environnemental avec enceinte thermostatée. Piloté par le logiciel ZEN.

 

Cet équipement est destiné à différentes applications d'imagerie multi-photonique :

• Imagerie in vivo multi-dimensionnelle, multi-couleur
• Imagerie sur petit animal
• Fluorescence, Seconde Génération d'Harmonique, Troisième Génération d'Harmonique
• Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS)

 

 

2. MICROSCOPIE A FEUILLE DE LUMIERE

ZEISS LightSheet Z1

Microscope à feuille de lumière complètement automatisé pour imagerie 3D très rapide de petits organismes vivants (type embryon) ou échantillons transparisés. Microscope équipé d'un bras d'illumination, d'un bras de détection (objectif 5x ou 20x) et de deux caméras sCMOS. Sources d'illumination : diodes laser 405nm, 488nm, 561nm ; possibilité de détecter du rouge lointain. Piloté par le logiciel ZEN.

ZEISS LSM 880 Airyscan

Microscope confocal à balayage laser avec un seul pinhole, sur statif inversé ZEISS Axio Observer. Ajustement de la bande détection à quelques nanomètres près. 3 détecteurs PMT dont un avec cathode GaAsP, beaucoup plus sensible + 1 détecteur PMT pour lumière transmise. Module Airyscan pour augmenter le SNR et la résolution, option Fast Airyscan. Excitation avec laser ou diodes laser : 405nm, 440nm, 458nm, 488nm, 514nm, 561nm, 633nm. Piloté par le logiciel ZEN.

 

• Échantillons fixés
• Imagerie multi-dimensionnelle, multi-couleur
• Imagerie haute résolution
• Système intégralement motorisé

 

 

 
ZEISS LSM 700  

Microscope confocal à balayage laser avec un seul pinhole, sur statif inversé ZEISS Axio Observer. Présence d'un dichroïque secondaire (VSD : Variable Secondary Dichroic de 400 à 700 nm) permettant d'ajuster la bande de détection de la fluorescence. 2 détecteurs PMT. Excitation avec diodes laser : 405nm, 488nm, 555nm, 639nm. Piloté par le logiciel ZEN. 

 

• Échantillons fixés
• Imagerie multi-dimensionnelle, multi-couleur
• Système intégralement motorisé

 

4. MICROSCOPIE A CHAMP LARGE

ZEISS AXIO IMAGER Z2 - module APOTOME 2.0

Microscope sur statif droit ZEISS Axio Imager Z2 motorisé, équipé d'un module Apotome pour faire du sectionnement optique en fluorescence et d'une caméra sCMOS Hamamatsu Orca flash 4.0 LT (Noir & Blanc, 16 bits, haute sensibilité). Filtres disponibles : Dapi/Hoechst, GFP, Cy3, dsRed, Cy5. Piloté par le logiciel ZEN.

 

• Échantillons fixés entre lame et lamelle
• Sectionnement optique : module Apotome

 

 

 

 

ZEISS 'Cell Observer' AXIO OBSERVER

Microscope sur statif inversé ZEISS Axio Observer motorisé, équipé d'une caméra sCMOS Hamamatsu Orca flash 4.0 LT (Noir & Blanc, 16 bits, haute sensibilité). Contrôle environnemental avec enceinte thermostatée. Filtres disponibles : Dapi/Hoechst, GFP, Cy3 avec source diode ; lumière blanche/transmise. Tous types de montages : lames, boîtes de Petri, boîtes multi-puits, … Piloté par le logiciel ZEN.

 

• Échantillons vivants ou fixés
• Longues acquisitions (jusqu'à plusieurs jours)

 

ZEISS AXIOVERT 200M (non-MRI)

 

 

 

Station développée sur la base d'un statif inversé ZEISS Axiovert 200M, un changeur de longueur d'ondes rapide (Sutter Lambda DG-4) et un caméra CoolSnap ES. Le système permet d'observer la réponse de plusieurs neurones en même temps, avec une fréquence de 3-4 images par seconde. Piloté par le logiciel MetaFluor.

 

• Échantillons vivants
• Imagerie calcique
• Perfusion du milieu

 

 

 

 

 

 

 

5. IMAGERIE AUTOMATISEE - SCANNER DE LAMES

HAMAMATSU NANOZOOMER

 

Système d'imagerie à haut rendement (automate), entièrement dédié au marquage immuno-histologique (image couleur). Acquisition automatique jusqu'à 210 lames. Fluorescence possible. Piloté par le logiciel NDP Scan.

 

• Colorations histologiques
• Prestation de service pour la numérisation des lames histologiques en fond clair ou en fluorescence

 

 

ZEISS AXIOSCAN Z1

Système d'imagerie à haut rendement (automate), essentiellement dédié à l'immunofluorescence (caméra Hamamatsu Orca flash 4.0, Noir & Blanc), acquisition possible de marquages histologiques avec une caméra couleur Hitachi. Acquisition automatique jusqu'à 100 lames. 7 LEDs disponibles : 385nm, 435nm, 475nm, 515nm, 555nm, 590nm, 635nm. Piloté par le logiciel ZEN.

 

• Batch de lames d'immunofluorescence

 

 

 6. MACROSCOPIE

Loupe binoculaire ZEISS Discovery.V20 (système non intégré à MRI) pour observation de gros échantillons (petits organismes, coupes entières de tissus…), avec acquisition possible d'images. Grand champ d'observation et grande distance de travail. Piloté par le logiciel Axiovision.

• Fond clair
• Fond noir
• Fluorescence
• LED transmitted illumination
• LED reflected brightfield illumination
  
  

7. ANALYSES D’IMAGES

Station dédiée à l'analyse d'images, assez puissante pour permettre l'exploitation d'images de plusieurs dizaines de GB. Logiciels : Fiji/ImageJ, Imaris, Volocity, Huygens, Definiens. La plateforme propose tout particulièrement son expertise pour le traitement et l'analyse d'images sous Definiens.

• Déconvolution
• Visualisation et/ou reconstruction des images 3D
• Quantification
• Segementation
• Colocalisation
• Tracking